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超聲波破碎細胞的常見問題講解

文章出處:www.fycg.com网责任编辑:成功超聲波细胞破碎作者:成功超聲人氣:-发表时间:2018-07-27 15:11:00【

細胞破碎是指利用外力破壞細胞膜和細胞壁,使細胞內容物包括目的産物成分釋放出來的技術,是分離純化細胞內合成的非分泌型生化物質(唐朝tv高清视频在线观看)的基礎。結合重組DNA技術和組織培養技術上的重大進展,以前認爲很難獲得的蛋白質現在可以大規模生産。

但是由于細菌、酵母、真菌、植物細胞壁的組成成分不同,且同類細胞結成的網狀結構也不同,所以其細胞壁的堅固程度不同。而動物細胞雖沒有細胞壁,但具有細胞膜,也需要一定的細胞破碎方法來破膜,達到提取産物的目的。

超聲波破碎細胞的常見問題

大肠杆菌表达外源蛋白,在超声破碎的时候,用含有1%triton-X-100的PBS悬浮,然后超声的效果较好,1%triton-X-100的作用还是很明显的,对其他的一些细菌同样起作用,比如链霉菌。细菌沉淀直接加样品1buffer,再加5ul的巯基乙醇,混匀,离心,煮沸10min,直接上样,染色脱色步骤如下:将胶放入适量的染色液微波炉里加热1min(下次适当补点醋酸即可),将染色液换成大量的水(自来水即可)在微波炉煮10min 就可以。在表达重组蛋白后超声波破碎细胞,采用冰浴,400w,破2s停1s,但是不一会就产生大量泡沫,影响了破碎功率,pbs和tris缓冲液都是这样,zui后都是破碎不完全,而我的目的蛋白就在这些未破碎的细胞中。

1、會産生氣泡是因爲你的探頭位置沒放好。探頭一定要接近底部,約25px(我一般是距底部0.5mm)。功率根據儀器不同會有所不同,但你可以觀察液面,有波動但不要太劇烈就好。

2、破3S停10S,破個二三十次看看。

3、变幅杆位置摆放也要注意,听声音如果不对的话就要及时调整。另外可以从菌浓度方面考虑。 在破碎时试着加大体积,强度zui好不要超过60%.

4、嘗試超8s停8s,對有些菌體蛋白來說,你的方法很難散熱,導致蛋白變性産生氣泡,zui好停頓時間稍長一些,這種情況多見于包涵體形式的蛋白。 

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